標準品是標記免疫分析定量的依據(jù)。標準品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中，或各實驗室之間使用的標準品不一致，則可影響到實驗結(jié)果的可比性。為此，對標記免疫分析所使用的標準品應(yīng)滿足如下要求。

　　一、標準品的要求

　　1、化學結(jié)構(gòu)：原則上標準品應(yīng)與被測物具有*相同的化學結(jié)構(gòu)，包括相同的立體化學結(jié)構(gòu)。但在實際工作中，用化學結(jié)構(gòu)*相同的物質(zhì)作標準品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學結(jié)構(gòu)還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標準品。此時，應(yīng)充分了解這些物質(zhì)與真正標準品之間的定量關(guān)系。

　　2、化學純度：所有通過化學合成法制備的小分子化合物，都應(yīng)是高化學純度的純品。對某些蛋白類物質(zhì)，則可能由于純化的方法不同而有差異。對此，在最初建立該方法時，應(yīng)與國ji上*的標準參考品或高純度的純品進行比對。

　　3、免疫純度：標記免疫分析是通過比較被測物質(zhì)與標準品的免疫活性實現(xiàn)的，故被測物質(zhì)與標準品對所用抗體的免疫活性應(yīng)該*一致，即兩者對所用的同一抗體有*相同的親和力。因此，標準品的免疫純度比其化學純度更重要。

　　4、反應(yīng)介質(zhì)：免疫學反應(yīng)受反應(yīng)介質(zhì)和溫度等條件的影響，所以理論上要求標準品和被測物應(yīng)在*相同的介質(zhì)中進行反應(yīng)。如測定血清中某物質(zhì)的濃度，其所用的標準品也應(yīng)溶解在無被測物的零值血清中；如測定尿液中某物質(zhì)的濃度，其所用的標準品也應(yīng)溶解在無被測物的尿液中等。但在實際工作中這一點很難做到。因為，血清中的成分十分復雜，因而無被測物的零值血清的制備非常困難，而且個體血清中還可能存在一些干擾物質(zhì)。理想的標準品應(yīng)該用與被測樣品相同的基質(zhì)(如血清)，先將被測物質(zhì)*去除，然后再加入已知量的被測物質(zhì)的純品。

　　5、干擾物質(zhì)：標準品中不能有干擾分析的物質(zhì)。在作為標準品使用前，必須對那些從機體提取到的大分子物質(zhì)活性進行測定。

　　6、標準品的批量：為保證檢測的連續(xù)可比性，每批標準品應(yīng)有相當大的量，以保證在較長的時間內(nèi)使用。每批標準品如保存的條件適當，在相當長的時間內(nèi)可保持其濃度和免疫活性的穩(wěn)定。這對于生產(chǎn)標記免疫分析試劑的廠家尤為重要。

　　二、標準品的分級

　　所謂標準品在英語中有三個名詞，即標準品 (standard)、校準品(calibrator)和參考品(reference)。這三個名詞的意義不*相同，但在國內(nèi)它們則經(jīng)常被混淆。目前在我國的標記免疫分析實踐中，所謂的"標準品"實際上是指校準品。為使用方便先仍用"標準品一詞"。

　　有關(guān)標準品可分為如下的等級：

　　【國際參考品(international reference)】：國際參考品是由WHO指ding的實驗室制備，并與有關(guān)國家的一定機構(gòu)聯(lián)系(在我國是衛(wèi)生部藥品與生物制品檢定所)，被國ji*為最gao級別的標準品。到目前為止，與標記免疫分析有關(guān)的已達數(shù)十種。但由于標記免疫分析方法的迅速發(fā)展，很多標記免疫分析方法還沒有國際參考品。

　　【國家ji標準品】：國家ji標準品是由國家的有關(guān)權(quán)wei機構(gòu)，用高化學純和高免疫純、低交叉反應(yīng)的純品制備的，供國家內(nèi)部使用。國家ji標準品應(yīng)與國際參考品或其他國家的國ji*標準品進行比對。我國現(xiàn)已有國ji*標準品數(shù)種，如胰島素(insulin)、絨毛膜促性腺素(hCG)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、肝膽酸(CG)、甲胎蛋白(AFP) 等。

　　【實驗室標準】：實驗室標準是由實驗室自己，或由生產(chǎn)廠家制備的標準品，又稱二級標準品。所有的二級標準品都必須經(jīng)過與國家標準品或國際參考品進行比對或校正。如沒有國際參考品或國家ji標準品的，也應(yīng)與國ji*的生產(chǎn)廠家的標準品進行比對。

　　三、標準品的制備、鑒定、與計量

　　1、標準品的制備：標準品的制備是非常復雜的問題，也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的制備。

　?。?）基質(zhì)的制備：如前所述，作為標準品的介質(zhì)(基質(zhì))成分應(yīng)與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標準品，應(yīng)用不含被測物質(zhì)的零血清制備，以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標準品用適當?shù)木彌_液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。

　　零值血清的制備方法有：

　　A、吸附法：血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸 (T3)、甲狀腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質(zhì)難以清除干凈，而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進行制備。

　　B、反復凍融法：對大分子活性物質(zhì)可選用低值血清，經(jīng)反復凍融使被測物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。

　　C、親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清，但本法比較復雜而且成本也高。

　?。?）標準物純品的選擇：應(yīng)選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應(yīng)含有與被測物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。

　?。?）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度，制成符合預(yù)定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。

　　2、標準品的鑒定

　?。?）免疫活性的鑒定：選用高特異性的抗血清分別作*標準品(如WHO的國際參考品或國家標準品)的待鑒定標準品的劑量反應(yīng)曲線，并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行，說明兩種物質(zhì)對同一抗體有相同的親和力，即二者是同質(zhì)性物質(zhì)。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行，說明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性，因而這一待鑒定的標準品是不能使用的。

　?。?）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與*的標準品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線。此時，兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量( ED50 )計算二者的換算系數(shù)，然后調(diào)整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應(yīng)曲線*或基本重合為止。

　　3、標準品的計量：許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進行合成，它們對作為標準品的要求可以得到基本的滿足，其計量多直接用單位體積中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最近WHO推薦用質(zhì)量單位取代重量單位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質(zhì)則比較復雜。由于得不到絕對的純品，故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質(zhì)量計量。因此，常用該物質(zhì)的生物活性單位表示，如IU / L、mIU / L等。

　　四、標準品的穩(wěn)定性與保存

　　如前所述，為保證檢測的連續(xù)可比性，每批標準品應(yīng)有相當大的量，以保證能在較長時間內(nèi)使用。因此，每批標準品應(yīng)在適當?shù)臈l件下保存，使其免疫活性和濃度保持穩(wěn)定。

　　1、影響標準品穩(wěn)定的因素

　　（1）基質(zhì)中的酶、細菌污染、pH的變化、氧化、潮濕等因素都可以導致標準品的變性，而且這些變化可因高溫和光照加速。

　?。?）在保存過程中發(fā)生聚合反應(yīng)等分子結(jié)構(gòu)的變化，可使標準品失活。

　?。?）容器內(nèi)壁的吸附作用和溶劑的蒸發(fā)可造成標準品濃度的改變。

　　（4）保存條件不適當也可以影響標準品的穩(wěn)定性，如反復的凍融可降低標準品的免疫活性等。

　　2、標準品的保存方法

　?。?）冷凍干燥法：冷凍干燥對標準品的濃度和免疫活性無明顯的影響，是目前最chang用的保存方法。冷凍干燥制品在低溫下，可在較長的時間內(nèi)保持穩(wěn)定。但應(yīng)用冷凍干燥制品時，復溶體積的準確度十分重要。因此，要用經(jīng)過校準的量器準確的復溶，以減少標準品的濃度誤差。

　?。?）在標準品中加一定量的防腐劑可減少細菌污染的影響。

　?。?）密閉真空保存或充入惰性氣體等方法也可以增加標準品的穩(wěn)定性。 目前最chang用的方法是：在標準品中加入少量的防腐劑(如0.1%疊氮鈉或0.1%硫柳汞)，冷凍干燥后密封，并在低溫下保存。但應(yīng)注意，一旦復溶后應(yīng)放低溫保存，并不得反復凍溶。復溶后的標準品其有效期明顯縮短，一般不超過6～8周，有些物質(zhì)可能更短。